产品目录
技术文章
当前位置:主页 > 技术文章 > 枸杞多糖的超声法提取法及抗氧化性研究
枸杞多糖的超声法提取法及抗氧化性研究
点击次数: 发布时间:2014-08-08
枸杞多糖的超声法提取法及抗氧化性研究
 
     1、枸杞多糖的含量测定 
 1)、标准曲线的绘制   精密称取于105%干燥至恒重的无水葡萄糖对照品100 mg,加入100 ml容量瓶中,用纯化水溶解至刻度。分别精密移取对照品储备液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 ml于100 ml量瓶中,加水稀释至刻度,然后各取1.0 ml于10 ml比色管中,分别加入5% 的苯酚溶液1.0 ml,摇匀后加入5.0 ml浓硫酸,立即摇匀,在沸水浴中加热15 min,冷却至室温。以纯化为空白对照,在487 nm处测吸光度值A。以吸光度值为横坐标,浓度为纵坐标,绘制标准曲线。
2)、样品含量的测定   取干燥的枸杞多糖供试品,按实际实验结果将其稀释至合适浓度。精密吸取待测液1.0 ml,置于10 ml比色管中,按“2.1.1”方法显色,测定A值,按公式计算多糖含量。按下式计算多糖含量(% ) = 3. 17C × D /W×100%,式中C为样品溶液的葡萄糖质量浓度(mg/m1),D为样品溶液的稀释倍数,f为换算因子(f=3.17) ,w为样品质量(mg)
    2、正交试验考察提取工艺(单因素试验)
1)、料液比的影响  称取枸杞样品4份,均为5g,分别加入lO、20、30、40倍水量,在50℃,pH=7,超声提取30 min,浓缩至20 ml左右,加5倍95%乙醇沉淀,沉淀再溶解,测定吸光度,从而比较多糖含量的提取率。
2)、时间的影响  称取枸杞样品4份,均为5 g,加入10倍水量,在50~C,pH=7,分别超声提取10 min、20 min、30 min、40min,浓缩至20 ml左右,加5倍95% 乙醇沉淀,沉淀再溶解,测定吸光度,从而比较多糖含量的提取率。
    3)、温度的影响  称取枸杞样品4份,均为5 g,加入10倍水量,分别在40℃、50℃ 、60℃ 、70℃ ,pH=7,超声提取从而比较多糖含量的提取率。
    4)、pH值的影响  称取枸杞样品4份,均为5 g,分别加入10倍水量,分别在pH=7、8、9、10,50℃ ,超声提取30 min,浓缩至20 ml左右,加5倍95%乙醇沉淀,沉淀再溶解,测定吸光度,从而比较多糖含量的提取率。
    3、正交试验设计
根据影响多糖提取的单因素试验结果,考察多因素对多糖得率及含量的影响,按正交设计表L9(3 )进行试验,每次取干燥枸杞子5.0 g,按2中单因素试验的因素和水平设计正交实验设计进行提取,提取完后过滤,浓缩滤液至20ml左右,置于100 ml的带塞锥形瓶中,加入95% 乙醇100 ml,静置16 h。将醇沉液离心分离(3000 r/min,10 min),固形物分别用95%乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤,水浴加热干燥得枸杞粗多糖,称重。
表3  枸杞多糖mg冰球突破豪华版提取法的正交因素水平表
      水平                                因素
                      料液比 A     温度/℃ B    PH C    时间/h D 
     1                 1:10          40        7         10
     2                 1:20          50        8         20
     3                 1:30          60        9         30
     4                 1:40          70        10        40
     4、工艺改进 
 我对于mg冰球突破豪华版提取法进行进一步的改进,前面我们对于mg冰球突破豪华版提取法的提取时间、pH值、温度和料液比的最佳工艺条件已经确定,对于mg冰球突破豪华版提取次数进行改进。做一个单因素试验,提取次数分别设定为1、2、3次。
5、枸杞多糖的抗氧化性研究
    1)、枸杞多糖的还原性的测定
     取2.5 ml多糖样品于试管中, 依次加入2.5m l 2. 5mol/L磷酸盐缓冲液( phosphatebu ffer saline, PBS, pH 6. 6)和2. 5m l 1%六氰合铁酸钾溶液(K3 Fe(CN )6 ), 50℃下保温20 min 后快速冷却, 再加入25m l 10%三氯醋酸溶液( TCA ), 以3 000 r /m in 的转速离心10m in, 取上清液2.5 ml,依次加入2. 5 m l蒸馏水, 0. 5 ml 0. 1%、三氯化铁溶液( FeCl3), 充分混匀, 静置10m in后, 在700 nm下测定其吸光度值(以蒸馏水代替样品的混合液作参比溶液), 吸光度值越高还原力越强。
    2)、枸杞多糖清除超氧阴离子自由基的能力
采用邻苯三酚自氧化法, 取4. 50ml 0.1mol/L Tris-HCl缓冲液( pH 8. 2), 依次加入1.00ml乙二胺四乙酸钠( EDTA )溶液, 1.00m l样品溶液, 2.40 ml水, 混匀, 于25℃水浴中反应10min, 再加入100ul 9 mmol/L 邻苯三酚, 加入时计时, 混匀, 准确反应60 m in后, 加入50ul 2mol/L HCl溶液, 终止反应, 在325 nm处测定吸光度值As。空白管以1.00m l蒸馏水代替1.00 ml样品, 操作方法同样品管, 可测得空白管的吸光度Ac。
 
清除率(% )=(Ac-As)/Ac×100
 
    As: 含有待测物的反应液于325 nm的吸光度值
Ac: 不含有待测物的反应液于325 nm 的吸光度值
 
点击这里给我发消息
点击这里给我发消息
电话:
0537-2336911
手机:
18354732881